[求救] competent cell製作

看板 Biotech

作者 bolly (bolly)

時間 2008-09-30 13:35:37

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我們實驗室之前都是直接買kit作transform 但是我覺得有點浪費所以想試著自己作作看我用一瓶看起來有點年代的氯化鈣配製成0.1M溶液(已滅菌) 將0.5ml over-night菌液加入50ml LB養到OD 0.4 3200g離心去除上清液加入20ml氯化鈣使懸浮置冰上40min 離心10min 去除上清液最後加1ml氯化鈣重新懸浮分裝0.2ml一管製作的菌種是DH5aphla 和BL21(DE3) 直接作transform 但是都長不出來我想請問製作過程還需要注意什麼小細節因為我是自己摸索已經作過好幾次都不成功之前有請別間實驗室的學姐教過有作出來但是使用的藥品是他們實驗室配的回來自己作的幾次都失敗很灰心= = -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)

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推 elite2 3200g，感覺有點快，我們都只是1000g而已，參考看看吧 09/30 13:40 1F

→ bolly 1000g是離心多久呢 09/30 14:11 2F

→ davideason 做這個超搞剛~連細菌生長狀況都要監控~用買的拉 09/30 14:50 3F

推 enisx 貼上 #14wnDD_4 參考本版我po的那篇, 之前我常作!! 09/30 15:10 4F

推 tsubasawolfy OD0.6已經快要過log期了吧- - 09/30 15:12 5F

→ tsubasawolfy 我們是0.375 通常0.32-0.35就會拿起來用了 09/30 15:12 6F

→ tsubasawolfy 還有CaCl2也要加一些東西 09/30 15:13 7F

推 konlon 做完放在四度冰箱 12-24小時使用可增加效率 09/30 16:36 8F

→ bolly 上面我有打錯應該是OD 0.4 抱歉 09/30 16:38 9F

※ 編輯: bolly 來自: 140.120.202.50 (09/30 16:39)

→ bolly 所謂的氯化鈣要再加一些東西是哪些東西? 09/30 16:40 10F

推 thshf CaCl2我會wash兩次，最後一次resuspend會多加glycerol抗凍 09/30 17:23 11F

推 cryosakura 小弟若沒全程在cold room做，也會全程在冰上 09/30 18:00 12F

→ cryosakura 不用pipette up and down來resuspend,要溫柔... 09/30 18:04 13F

→ cryosakura CaCl2重配一罐,再試一次吧! 09/30 18:05 14F

→ alaric 2500xg, 2400xg 09/30 20:29 15F

→ bolly 氯化鈣我再向別間借一些來試試看吧 10/01 00:56 16F

推 jabari 原po可以去參考Q牌QIAexpressionist系列裡面的作法效果好 10/01 00:57 17F

→ sneak 氯化鈣我再向別間借一些 https://muxiv.com 11/11 01:01 18F

→ sneak 做這個超搞剛~連細菌生 https://daxiv.com 01/03 16:45 19F

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